1. BL21菌株在原核表达中的优势

尊龙凯时公司推荐使用BL21菌株进行原核表达，因为该菌株是Lon和ompT蛋白酶缺陷型。Lon蛋白酶主要在细胞内发挥作用，而ompT则为外膜蛋白酶。两者的缺失可有效减少目的蛋白在细胞内的降解，从而显著提升GST标签蛋白的稳定性和产量。

2. 优化蛋白表达的策略

在优化蛋白表达时，培养温度、增加通气性以及优化诱导条件是关键因素。例如，在原核表达体系中，可以探索IPTG诱导剂的浓度、诱导时间以及培养温度，以实现最佳表达效果。

3. 各类标签切割酶的比较

尊龙凯时在蛋白质纯化中使用的几种标签切割酶（如PreScission、Thrombin和FactorXa）有以下区别：

• 这些内切酶的识别序列不同。
• PreScission酶可以在4℃下进行切割，且带有GST标签，便于通过GST柱去除。
• Thrombin和FactorXa更适合在室温下切割，切割后可通过苯甲脒柱（HiTrapBenzamidineFF）去除多余的酶。
• 三种酶的酶切缓冲液各有不同：
  • PreScission使用50mM Tris-HCl, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, pH 7.5，在5°C下反应16小时。
  • Thrombin使用PBS，在22°C下反应16小时。
  • FactorXa需要1mM CaCl2，150mM NaCl和50mM Tris-HCl（pH 7.5），在22°C下反应16小时。
• 进行GST标签酶切时，确保酶的用量和酶切时间在适宜的温度及缓冲液中进行。

4. GST标签纯化的小提示

在GST标签纯化过程中，建议在结合缓冲液和洗脱缓冲液中添加1-10mM DTT，以防止GST氧化聚集和还原型谷胱甘肽的氧化。此外，保持缓冲液的pH在合适范围内，结合缓冲液的最适pH为6.5–8，洗脱缓冲液的pH可提高至8–9。由于GST结合动力学较慢，若目标蛋白结合较弱，可适当降低上样流速。

5. 微信Glutathione Sepharose HP与其变种的选择

尊龙凯时的Glutathione Sepharose HP、FF和4B系列填料均为经经典验证的GST标签纯化产品。三者的配基相同，但配基密度和填料骨架有所不同。其中，4B产品的配基密度和载量较高，适合于高效的蛋白纯化需求。

6. GST填料的清洗与耐受性

GST填料不耐受NaOH处理，0.5M NaOH会导致填料配基彻底失活。对于填料的清洗，建议根据产品说明书进行操作。为去除蛋白残留，推荐使用6M盐酸胍，而对于疏水类型的残留，可以使用70%乙醇或1% Triton X-100。